Preparation and studies on immobilized alpha-glucosidase from baker's yeast Saccharomyces cerevisiae

Abstract

α-Glucosidase from S. cerevisiae was covalently immobilized onto Sepabeads EC-EA by the glutaraldehyde method. An analysis of the variables controlling the immobilization process is first presented and it is shown that the highest coupling of α-glucosidase occurred within 24 h. Also, a loading of 30 mg/g support proved to be effective, resulting in a rather high activity of around 45 U g-1 with a satisfactory degree of enzyme fixed. Both free and immobilized enzymes were then characterized by determining the activity profile as a function of pH, temperature and thermal stability. The obtained immobilized preparation showed the same optimum pH, but a higher optimum temperature compared with the soluble one. In addition, the immobilized enzyme treated at 45°C for 1 h still retained an activity of around 20 %, whereas the free enzyme completely lost its original activity under this condition. In conclusion, the developed immobilization procedure is quite simple, easily reproducible and provides a promising solution for the application of immobilized α-glucosidase.

Малтаза из S. cerevisiae је ковалентно имобилизована на Sepabeads EC-EA након акти- вације носача раствором глутаралдехида. Испитивањем кинетике имобилизације утврђено је да се 25 % ензима имобилизује након 24 часа. Имобилизована α-глукозидаза има исти pH оптимум као и растворни ензим, док је оптимална температура за активност имобилизованог ензима увећана за 10 °C у поређењу са растворним ензимом. Када се упореде заостале активности растворне и имобилизоване форме α-глукозидазе, након инкубације од 1 h на α- 45 °C растворни ензим не показује активност док имобилизована форма задржава око 20 % почeтне активности. Имобилизована форма ензима задржава 20 % почетне активности чак и после 3 h инкубације на 45 °C.