Spektrofotometrijsko određivanje acetaldehida u biološkom materijalu

Abstract

Za analizu korišćeni su uzorci venske krvi pripremljenih sa dodatkom ACĐ rastvora i hloralhidrata i do upotrebe čuvani na <4°C. Standardni rastvori acetaldehida su pripremljeni razblaživanjem standardnog rastvora acetaldehida koncentracije 780g/L. Acetaldehid je izdvojen destilacijom u puferovani rastvor tiosemikarbazida. Koncentracija nagrađenog tiosemikarbazona određena je merenjcrn absorbance na 258 nm. Lspitivanjanjcm određeni su najoptimalniji uslovi za primenu metode kod direktne reakcije tiosemikarbazida sa acctaldehidom i to: pH reakcione sredine (plI6), koncentracija tiosemikarbazida (0,004M), vreme odvijanja reakcije (20min.). Ispitivani su uslovi reakcije tiosemikarbazida sa acetaldehidom, izdvojenog destilacijom. Ova ispitivanja su posebno značajna jer se acetaldehid nalazi u krvi koja sadrži mnoge supstance koje bi mogle ometati određivanje pa je potrebno izdvajanje acetaldehida iz uzorka destilacijom ili nekom drugom pogodnom metodom. Pored toga ispitana je i postojanost tiosemikarbazidnog reagensa (30 dana na +4°C), postojanost acetaldehida u uzorku krvi (7dana +4°C uz dodatak hloralhidrata). Na kraju izvršeno je i upoređivanje osetljivosti i preciznosti tiosemikarbazidne metode u intervalu koncentracije acetaldehida od 0,1-1,0 mg/L. Metoda je proverena primenom za određivanje kako slobodnog tako i za proteine vezanog acetaldehida. Iz dobivenih rezultata utvrđeno je da je predložena metoda osctljivija i preciznija pa se može upotrebiti za određivanje malih količina acetaldehida u biološkom materijalu složenog sastava. Metoda se pokazala dovoljno specifičnom da zameni skupa i složena, enzimska, GLC i HPLC određivanja.